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大鼠总胆固醇(TC)Elisa试剂盒的操作步骤
  • 公布日期:2018-11-08      扫瞄次数:116
    • 大鼠总胆固醇(TC)Elisa试剂盒操作步骤

      1.加样:分别设标准孔、待测样品孔、空白孔。设标准孔 7 孔,依次加入 100μL 不同浓度的标准品 (见试剂预备 2)。空白孔加 100μL(见试剂预备第二步*后一管),余孔加待测样品 100μL,酶标板加上覆膜,37℃ 温育 2 小时。

      2.弃去液体,甩干,不用洗涤。

      3.每孔加检测溶液 A 工作液 100μL(临用前配制),酶标板加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。

      4.弃去孔内液体,每孔用 300μL 的洗涤液洗涤,浸泡 1-2 分钟,吸去 (不可触及板壁) 或甩掉酶标板内的液体,在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次 (也可轻拍将孔内液体拍干),重复洗板 3 次。*后一次洗涤后,要把孔内的洗涤液完全甩干。自动洗板机亦可。

      5.每孔加检测溶液 B 工作液 (临用前配制)100μL,加上覆膜,37℃ 温育 1 小时。

      6.弃去孔内液体,甩干,洗板 5 次,方法同步骤 4。

      7.每孔加底物溶液 90μL,酶标板加上覆膜,37℃ 避光显色 (反应时间控制在 15-25 分钟,不要超过 30 分钟。当标准孔的前 3-4 孔有明显的梯度蓝色,后 3-4 孔梯度不明显时,即可终止)。

      8.每孔加终止溶液 50μL,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序不同。如躲藏颜色不匀一,请轻轻晃动酶标板以使溶液混合均匀。

      9.在确保酶标板底无水滴及孔内无气泡后,马上用酶标仪在 450nm 波长测量各孔的光密度 (O.D. 值)。

      注重:

      1.试剂预备:预备一次实验所需要的酶标条,其它的可从微孔板上拆下,密封,按照说明书要求保存,以备下次使用。

      2.加样:实验操作中请使用一次性的吸头,幸免交叉污染。加样时注重不要有气泡,将样品加于酶标板底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。加样或加试剂时,个孔与*后一个孔加样之间的时间间隔假如太大,将会导致不同的「预温育」时间,从而明显地影响到测量值的错误性及重复性。因此,一次加样时间 (包含标准品及全部样品) 控制在 10 分钟内。推举设置复孔进行实验。

      3.温育:为预防样品蒸发,实验时请将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内,以幸免液体蒸发,洗板后应尽快进行下步操作,任何时侯都应幸免酶标板处于干燥状态,同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

      4.洗涤:充分的洗涤非常重要,在每次洗涤过程中,都要将洗涤液完全甩干。洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干,勿将滤纸直接放入反应孔中吸水,同时要消除板底残留的液体和手指印,幸免影响*后的酶标仪读数。假如有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实 验过程中。

      5.反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化 (比如,每隔 10 分钟观察一次),如颜色较深,请提前加入终止液终止反应,幸免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。

      6.底物:底物请避光保存,在储存和温育时幸免强光直接照耀。

      7.假如实验室内湿度低于 60%,推举使用加湿器降低湿度水平。

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