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小鼠检测试剂盒试验前后应该注重哪些?
  • 公布日期:2018-12-25      扫瞄次数:65
    •    小鼠检测试剂盒试验前后应该注重哪些?
         在小鼠检测试剂盒实验前的注重事项
         1、粗心阅读说明书;
         2、确定试剂盒在有效期内;
         3、按说明书确定全部试剂齐全(数量、体积)
         4、标本制备要规范,每份标本体积要按2-3个复孔以上的量制备(贮存),尽量分装做备份。短期内无法实验者,注重低温保存;
         5、预备好全部实验额外所需物品,如试管、吸头、移液器、离心机等;
         6、根据检测标本数量确定所需试剂的量;
         7、按说明书将所用试剂平衡至室温,配制所需试剂;
         ELISA试验时,注重事项如下:
         1.试验时,应分别以阳性对比与阴性对比控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的错误性。有时本底较高,说明有非特异性反应,可采纳血清或BSA等封闭。
         2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包含:
        (1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,小鼠检测试剂盒在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否低劣。
        (2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采纳4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度进行包被后,在其它试验条件不同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。
       
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