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人结直肠腺癌细胞培养步骤

点击次数:75 公布时间:2018/11/12
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人结直肠腺癌细胞细胞培养步骤

排列5一.培养基及培养冻存条件预备:

1) 预备F-12K培养基(F-12K:SIGMA,货号N3520, 添加0.1 mg/ml 肝素; 0.03-0.05 mg/ml 内皮细胞生长因子),90%;胎牛血清,10%。

排列52) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

排列53) 冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 人结直肠腺癌细胞细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中快速摇摆解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将全部细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:假如细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

排列5对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,快速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

排列53)细胞冻存:待细胞生长状态低劣时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。


人结直肠腺癌细胞注重事项:

排列51. 收到细胞后,若发觉干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请马上告知我们。

排列52. 全部动物细胞均视为有潜在的生物危害性,一定在二级生物安全台内操作,并请注重防护,全部废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

 
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