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抗多发性肌炎硬皮病抗体ELISA试剂盒操作流程和试剂注重事项

点击次数:79 公布时间:2018/11/22
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定性测定的结果推断是对受检标本中是否含有待测抗原或抗体作出“有”或“无”的复杂回答,分别用“阳性”、“阴性”表示。“阳性”表示该标本在该测定系统中有反应。“阴性”则为无反应。人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒用定性推断法也可得到半定量结果,即用滴度来表示反应的强度,其实质仍是一个定性试验。在这种半定量测定中,将标本作一系列稀释后进行试验,呈阳性反应的zui高稀释度即为滴度。根据滴度的高低,可以推断标本反应性的强弱,这比观察不稀释标本呈色的深浅推断为强阳性、弱阳性更具定量意义。
ELSIA操作步骤复杂,影响反应因素较多,一般是固相载体的包被难达到各个体之间的一致,因此在定量测定中,每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在不同的条件下制作标准曲线。测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线zui高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于坎坷,中心较呈直线的部分是zui理想的检测区域。
测定小分子量物质常用

抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒操作流程:
    1. 抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒(小鼠-牛-鱼)从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
    2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
    4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
    5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
    6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波短处测定各孔的OD值。
抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒我们上海斯信生物科技排列5玩法ELISA试剂盒的特点:
    1.专一性强。抗原与抗体的免疫反应是专一反应,而免疫酶技术以免疫反应为基础,所检测的对象是抗原(或抗体),使用的抗体除标记了酶以外,与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。
    2.灵敏度高。由于抗体联结上了酶,因此,借助于酶与底物的显色反应,显示抗原与抗体的结合,大大降低了检测的灵敏性,使检测水平接近放射免疫测定法。
    3.样品易保存。经过酶反应显示的有色产物大多比较稳定,因此有利于样品的保存。
    4.结果易观察。对检测结果即可用肉眼观察,又可用显微镜观察,也可以用分光光度计进行比色测定,还可用显微镜观察。这是因为某些酶反应产物能使电子密度发生改变,从而引起被检测物的显示。
    5.可以定量测定。溶液中的抗原物质,应用酶免吸附技术进行比色测定,依据光密度值的变化,可以定量。估量用细胞分光光度计可对组织内的抗原进行免疫酶技术的定量测定。
    6.可以大规模测定样品。如有成千上万份样品需要进行检测,免疫酶技术都能在较短时间内完成。
    7.仪器和试剂复杂。对免疫没技术来说,不需要荧光显微镜,也不需要测定放射性的一般仪器,所用仪器及试剂均属一般性仪器与试剂,普通实验室及生产应用单位均易购置.

 
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