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癌蛋白诱导转录物3elisa试剂盒的操作流程和样本说明及保存条件

点击次数:77 公布时间:2018/11/26
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癌蛋白诱导转录物3检测试剂盒操作流程如下:

(1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对比孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对比孔,加入纯细胞裂解液100μl。

(2)酶标板置4℃,包被过夜。

排列5(3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。

(4)阴性对比孔每孔加入PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。

排列5(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

排列5(6)洗板,同(4)。

(7)每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。

(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。

(9)洗板,同(4)。

排列5(10)每孔加TMB显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。

(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。

(12)分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终测得的OD值为两者之差(W1-W2),以增加由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

排列5(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对比(N)的 OD值后,计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。

排列5样本:血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

保存条件:2~8℃,zui佳温度6摄氏度,有效期6个月。

 
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