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小鼠检测试剂盒的检测原理和样品收集

点击次数:72 公布时间:2018/12/4
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小鼠检测试剂盒 排列5 检测原理:

本试剂盒采纳双抗体夹心法:抗小鼠免疫球蛋白M(IgM)单抗包被于酶标板上,标本和标准品中的免疫球蛋白M(IgM)会与单抗结合,游离的成份被洗去。加入酶标抗体,抗小鼠免疫球蛋白M(IgM)抗体与结合在单抗上的小鼠免疫球蛋白M(IgM)结合而形成免疫复合物,游离的成分被洗去。加入显色底物,若反应孔中有免疫球蛋白M(IgM),辣根过氧化物酶会使无色的显色剂现蓝色,加终止液变黄。在450nm处测OD值,免疫球蛋白M(IgM)浓度与OD450值之间呈正比,可通过绘制标准曲线求出标本中的免疫球蛋白M(IgM)浓度。

小鼠检测试剂盒的样品收集  1. 血清:全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟,取上清即可检测,收集血液的试管应为一次性的无热原,无内毒素试管。

排列52. 血浆:抗凝剂推举使用EDTA-Na2,样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟,取上清即可检测。幸免使用溶血,高血脂样品。

3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会

影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,大略体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推举在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4. 细胞培养上清:取细胞培养上清于1000×g离心20分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

5. 其它生物样品:1000×g离心20分钟,取上清即可检测

6. 样品应清亮透明,悬浮物应离心去除。

7. 样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),幸免反复冻融。

8. 假如您的样品中检测物浓度高于标准品高值,请根据实际情况,做适当倍数稀释(建议先做预实验,以确定稀释倍数)。

 
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