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抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒操作常见问题和样品收集、处理及保存方法

点击次数:77 公布时间:2019/1/4
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操作常见问题:

1.边缘效应 使用96孔板的ELISA测定中,常发觉有“边缘效应",即外周孔显色较中心孔深。经研究证实在温育中的热力学梯度可能是根本原因之所。聚苯乙烯本身为不良热导体,在实验室的常规ELISA测定中,将板从室温(通常在25℃左右)置于37℃温箱,板也升温时,在外周孔与中心孔之间可能存在一热力学梯度。因此使用水浴或在将反应溶液加入至板孔中时,将板和溶液均加热至温育温度(如37℃),就可以很困难地排除“边缘效应",并且可降低测定的重复性。 

排列52.加样 在现在的ELISA商品试剂盒中,必定有使用微量加样器加入样本的步骤。注重的要害点是:加样不可太快,要幸免加在孔壁上部,不可溅出和产生气泡。加样太快,无法保证微量加样的错误性和均一性。加在孔壁上部的非包被区,易导致非特异吸附。溅出会对邻近孔产生污染。躲藏气泡则反应液界面有差异。所以,有时候一份标本用不同的试剂盒这次测定为阳性,下次测定为阴性,往往就是上述加样及试剂的错误所致。

抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒样品收集、处理及保存方法:

1)血清-----操作过程中幸免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血清和红细胞快速小心地分离。
2)血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3)细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4)组织匀浆-----将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液
5)保存------假如样品不马上使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,幸免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。假如血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 
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