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脂氧素A4(LXA4)(LXA4产品说明

点击次数:49 公布时间:2019/6/17
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                                         脂氧素A4(LXA4)检测试剂盒产品说明

          使用目的:                                            

排列5                    本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中 8 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量。

实验原理

排列5本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠 8    羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)水平。用纯化的

大鼠 8     羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次

排列5加入 8 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),再与 HRP 标记的 8 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)抗体结合,形成

抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下

排列5转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的  8       羟基脱氧鸟苷

(8-OHdG)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值),通过标准曲线计算样

排列5品中大鼠 8 羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)浓度。

 

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能

排列5马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应幸免反复冻融

2.不能检测含 NaN3 的样品,因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

 

 

 

 

2.      加样:分别设空白孔(空白对比孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作不同)、标准孔

 

排列5待测样品孔。在酶标包被板上标准品错误加样 50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,

然后再加待测样品 10µl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽

量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

排列53.      温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。

4.      配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

排列55.      洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此

重复 5 次,拍干。

排列56.      加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。

排列57.      温育:操作同 3。

排列58.      洗涤:操作同 5。

9.      显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色

15 分钟.

10.    终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.    测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

操作程序总结:

计算

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的

OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标

准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,

即为样品的实际浓度。

 

 
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