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如何让ELISA试剂盒更稳定说明

点击次数:31 公布时间:2019/7/10
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                                 如何让ELISA试剂盒更稳定说明

   实验elisa试剂盒的错误度、周密度、灵敏度、特异性、稳定性等指标,决定了产品质量的好坏。上海邦景将进一步加强人才经营、产品经营,不断提升企业的核心竟争力,实现具有高科技产业体系、知识化创业团队的国际化的公司,服务于生命科学领域,迎接世界经济一体化所带来的机遇与挑战。高品质的试剂盒都需要对这些指标进行检测。目前定义高品质试剂盒一般会检测八项指标,

ELISA试剂盒操作稳定方法:

  ELISA检测系统可谓是免疫学反应应用到科研生产中*为广泛*为灵敏的技术手段。可是在新老手操作过程中总是会躲藏或大或小的问题,本人在刚结尾做ELISA时就面临很多困难,虽然有师兄师姐铺路,但还是经常做得一塌糊涂,比如说花板,假阳性,全显色,全部显色,显色比空白还低,自己也为此苦恼过很长一段时间,随着自己技术水平得降低,或多或少地也把握了ELISA体系的脾气,也是熟能生巧吧,现在做方阵,做ELISA已是轻车熟路了,以前检测一种抗体用整整一下午还算得晕晕的,现在给我十个八个的从包被到显色,一个工作日基本搞定。下面就由我抛砖引玉地来说一下,做ELISA的经验总结:

 1、包被原的性质很重要,蛋白浓度,是否降解,这关系到你做出的抗体可不可以被其识别,所以保存抗原很重要,我做重组蛋白时,师兄都严格警告我一定要在冰浴下缓缓融化就是这个道理。还有有的包被原可能不是蛋白,对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被,我把方法简要的列出如下:①亲和素生物素:先亲和素先包被载体,加入生物素化的DNA,这种包被方法均匀、脆弱,已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。②脂类物质:可将其在有机溶剂(例如乙醇)中溶解后加入ELISA板孔中,开盖置冰箱guo ye或冷风吹干,待酒精挥发后,让脂质自然干固在固相表面。③小分子一定依靠和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。

 2、包被液的选择,一般选择ph9.6的碳酸盐缓冲液。但有时由于试验的需要,包被原的一般性也可能采纳中性的缓冲溶液来包。应注重以下原理:由于蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的,靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用,这种物理吸附是非特异性的,受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响,大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团,故更易吸附到固相载体表面。大略的试验还要有脆弱的理论外也要实践,看一下*终可不可以应用到自己试验当中去。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液,还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。

 3、封闭:继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙,从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。常用封闭剂有:0.05%-0.5%的BSA;10%的小牛血清或1%明胶;脱脂奶粉,比较价廉,可以高浓度使用(5%-10%);还有一些稀有用到的各种动物血清(主要为了排除相反蛋白干扰)和酪蛋白等等。但*终选用什么,要依据试验大略来实践。

 4、洗涤板:可以说在ELISA操作中,洗涤是*主要的要害技术。因为聚苯乙烯等塑料对蛋白质的吸附是普遍性的,为达到分离游离的和结合的酶标记物的目的,清除残留在板孔中游离的物质,以及非特异性地吸附的干扰物质,在洗涤时又应把这种非特异性吸附的干扰物质洗涤下来。所以在洗板时会有一定误差,人为因素很大(当然有条件的用洗板机除外),洗的不彻底或串了孔,对如此灵敏的ELISA系统可是不小的影响。

 
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