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PRRSV重组N蛋白表达、纯化及间接ELISA检测试剂盒的研制
  • 公布日期:2018-11-13      扫瞄次数:74
    • 抗多发性肌炎硬皮病抗体试剂盒排列5采纳RT-PCR扩增出大小409bp猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因(PRRSV N gene),将该基因克隆到表达载体pGEX-KG,构建重组表达载体pGEX-KG-N,转化表达菌株BL21(DM3)诱导表达

      排列5经SDS-PAGE和Western blot分析表明,重组N蛋白获得了表达,融合蛋白相对分子质量为41 000,并具有低劣的免疫学活性。扩大诱导培养,收集菌体,提取包涵体,用GST-Protein Purtification Kit亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳检测纯度达到90%以上,可满足诊断抗原质量要求。

      用纯化PRRSV重组核衣壳蛋白GST-N为包被抗原,建立检测PRRSV血清的间接ELISA诊断方法,并组装ELISA试剂盒。优化后抗原最适包被质量浓度为2.5mg/L;血清最适稀释度为1∶100;对血清样本检测临界值为0.224;与美国IDEXX公司的HerdChek ELISA试剂盒符合率为92%,特异性为95%,敏感性为90%;与猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒、猪乙型脑炎病毒、猪圆环病毒、猪瘟病毒等常见猪生殖障碍病标准阳性血清无交叉反应。

      ELISA试剂盒批内和批间变异系数分别为3.44%~6.34%和5.04%~7.64%。置4℃条件保存12个月,试剂盒稳定性无明显改变。该试剂盒对350份临床疑似血清检出率为88.6%。研制的ELISA试剂盒为PRRSV临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。

      排列5RIP1 C5 ELISA Kit 受体相互作用蛋白激酶1抗体 ?0.1ml

      RNF7 C4 ELISA Kit 环指蛋白7抗体 ?0.2ml

      RPS3 C3 ELISA Kit 核糖体蛋白S3抗体 ?0.2ml

      排列5RRAS C5a ELISA Kit 原癌基因R-Ras抗体 ?0.2ml

      Phospho-Ret (Tyr905) C1QTNF1/CTRP1 ELISA Kit 磷酸化指状蛋白RET抗体 ?0.1ml

      RCC2 C1q ELISA Kit 染色体浓缩调节蛋白2抗体

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